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碱基编辑诱变绘制出调整人类T细胞功能的等位基因图谱
2023/12/29


美国加州大学旧金山分校Alexander Marson等研究人员合作发现,碱基编辑诱变绘制出调整人类T细胞功能的等位基因图谱。相关论文于近日在线发表于国际学术期刊《自然》。

研究人员开发了一个大规模碱基编辑诱变平台,目的是精确定位编码可调节原代人类T细胞活化反应的氨基酸残基的核苷酸。研究人员生成了一个包含约117000个单向导RNA分子的文库,将碱基编辑靶向385个与T细胞功能有关的基因的蛋白质编码位点,并系统地鉴定了调节T细胞活化和细胞因子产生的蛋白质结构域和特定氨基酸残基。研究人员发现了广泛的等位基因,包括编码PIK3CDVAV1LCP2PLCG1DGKZ等蛋白中关键残基的变体,其中既有功能增益突变,也有功能丧失突变。研究人员验证了许多等位基因的功能效应,并进一步证明碱基编辑突变可以正反两方面调节T细胞的细胞毒性功能。

最后,通过使用对原间隔基序要求宽松的碱基编辑器(NGNGG)进行更高分辨率的筛选,研究人员发现了可用于调整T细胞功能的特定结构域和蛋白质-蛋白质相互作用位点。因此,原代免疫细胞中的碱基编辑筛选提供了生化见解,并有可能加速免疫疗法的设计。

研究人员表示,CRISPR筛选技术是发现控制T细胞功能的基因的有力工具,并为免疫疗法提名了候选靶标。然而,还需要新的方法来探测关键基因中的特定核苷酸序列。在原代人类T细胞中进行系统突变可以发现调整特定表型的等位基因。DNA碱基编辑器是高效引入靶向突变的强大工具。

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